Mikrobiologi

Bioburden

ALS erbjuder bioburden (totalantalsbestämning) genom att kvantitativt bestämma antalet viabla aeroba mikroorganismer, jäst och mögel i eller på läkemedel och medical device. Detta är ett bra sätt att kontrollera produktionshygien, få en uppfattning om mikrobiell kontamination, dess ursprung och karaktär. Analysen används också för att påvisa att produkten eller produktionslinjen uppfyller internt och externt fastställda gränsvärden för aktuell produkt/produktion. Metoderna är utformade i enlighet med gällande farmakopé.

Vanliga provtagningsställen

• Bulkproduktion
• Råmaterial
• Sluttest för frisläppning

Läs mer om medical devices här.

Sterilkontroll

ALS erbjuder sterilkontroll. Kvalitativ analysmetod utförs på aseptiskt fyllda eller på slutsteriliserade produkter. På ALS utför vi sterilkontroll i vårt nya renrum. Provsättningen sker i ”EU-GMP-Klass-A” LAF-bänk med omgivande klass-B yta. Vi har en validerad genomräckningsautoklav för enklare inslussning av material och utensilier. Vårt renrum är auditerat av Läkemedelsverket, Swedac samt amerikanska FDA. Sterilkontroll görs antigen via direktinokulering eller med membranfiltreringsmetod.

Direktinokulering

• Produkten inokuleras direkt i två olika typer av odlingsmedia: ett som stödjer tillväxt av aeroba bakterier och ett för anaeroba bakterier.
• Proverna inkuberas under 14 dagar.
• Metoden är lämplig för produkter som är svåra att filtrera eller där endast små volymer finns tillgängliga.

Membranfiltrering

• Produkten filtreras genom ett membran som fångar upp mikrobiella föroreningar.
• Filtren sköljs för att avlägsna inhibitorer och produktrester innan de inkuberas i två olika typer av media under 14 dagar.
• Metoden är väl lämpad för större volymer och produkter med inhibitorer som kan störa mikrobiell tillväxt.

Endotoxinanalys

ALS utför endotoxintestning med Limulus amebocytlysat (LAL; Bacterial Endotoxin Test) för att säkerställa att injicerbara läkemedel och medicintekniska produkter är säkra för patienter. Bakteriella endotoxiner är lipopolysackarider från Gramnegativa bakteriers yttre cellmembran. 

De kan även vid mycket låga halter, utlösa kraftiga immunsvar och feber och i allvarliga fall leda till septisk chock. Endotoxiner är värmestabila, och toxiciteten kvarstår även när den viabla bakteriecellen är borta. Sterilisering, såsom autoklavering eller etylenoxid, avdödar viabla bakterier men tar inte bort endotoxiner. En produkt kan därför vara steril men ändå innehålla endotoxin. Endotoxinkontroll är ett krav enligt Farmakopén för injicerbara läkemedel, vatten för injektion (WFI) och medicintekniska produkter med blod- eller vävnadskontakt.

Analysen utförs enligt Ph. Eur. 2.6.14 och USP <85>. Vi väljer metod utifrån produktens egenskaper och regulatoriska krav och kan vid behov nå en känslighet på 0,005EU/ml för produkter med särskilt låga endotoxingränsvärden.

För produkter med känd interferens genomför vi ett lämplighetstest, ett Interfering Factor Test (IFT), för att bekräfta att metoden kan detektera och kvantifiera endotoxinhalten på ett tillförlitligt sätt utan att bli påverkad av produktspecifika hämmande eller förstärkande effekter. Vid konstaterad interferens anpassar vi metoden, till exempel genom spädning, för att säkerställa tillförlitliga resultat.

Gel-clot-metoden — Method A (kvalitativ) och Method B (semikvantitativ)

Ett lysat med känd känslighet reagerar med endotoxin och bildar en detekterbar gel. Metoden lämpar sig väl för pass/fail-frisläppning mot ett fastställt gränsvärde. Den semikvantitativa varianten bestämmer brytpunkten för gelbildning genom spädning. Prover och spikprov analyseras i dubbletter. 

Kinetisk kromogen metod — Method D (kvantitativ)

Färgutvecklingens hastighet mäts i förhållande till provets endotoxinkoncentration. Metoden ger ett exakt kvantitativt resultat som är värdefullt när ett numeriskt endotoxinvärde krävs, till exempel för trendanalys eller för produkter nära gränsvärdet.

Täthetstest - CCIT

ALS erbjuder två varianter av täthetstest för förpackningar (Container Closure Integrity Test) syftet med testerna är att säkerställa att förpackningar och deras förslutning är täta och inte genomsläppliga för mikroorganismer respektive färglösning.

Bakteriologiskt täthetstest

Förpackningar fylls med odlingsmedium, nedsänks i en bakterielösning och utsätts för tryck/vakuum, varefter de inkuberas och inspekteras för eventuell växt.

Täthetstest blåbad

Förpackningar sänks ner i en vätska med lösning av kristallviolett och utsätts för tryck och vakuum. Förpackningarna undersöks sedan för att se om vätskan läkt in i förpackningarna. Metoden kan utföras både med tomma förpackningar och förpackningar som först fyllts med en färglös vätska. 

Representativt provuttag

För att få ett rättvisande resultat är det viktigt att ta ut ett representativt antal förpackningar som grund till beslut kan ISO 2859-1 ligga.

Vanliga förpackningar som testas:

• Vialer
• Ampuller
• Sprutor

Renrumsvalidering

ALS i Sollentuna utför kvalificering av renrum med hjälp av mikrobiologisk utvärdering och partikelmätning.

• Ackrediterad provtagning och analys
• Upprättande av kontrollplan
• Upprättande av testplan och protokoll 
• Upprättande av styrande instruktioner

Belastningstest

Belastningstest är en kvantitativ metod för att mäta effekten i ett konserveringsmedel i produkter som kosmetika, diagnostiska kit och läkemedel. Produkten inokuleras med bestämda typer och bestämt antal mikroorganismer. Bedömning av produktens konserverande effekt, sker med avseende på reduktion av inokulerade viabla mikroorganismer av känd mängd.

Det är viktigt att specificera vilken typ av produkt samt enligt vilken farmakopé testet skall utföras då de bestämmer gränser och uttag för belastningsstudien.

Läs mer om kosmetik. 

Omgivningshygien

ALS  erbjuder en ackrediterad och kvalitetssäkrad mikrobiologisk monitorering av renrum, med särskilt fokus på det slutgiltiga steget i processen, från inkubering, avläsning och rapportering. 

Vi ansvarar för inkubering och mikrobiologisk avläsning av bland annat yt- och luftprover enligt gällande krav och standarder. All analys sker inom vårt ackrediterade laboratorium och ger tydliga och tillförlitliga analysresultat för uppföljning av hygienstatus och uppfyller regulatoriska krav. 

 

Tilläggstjänster vid avläsning:

• Grovtypning av isolat inför vidare identifiering (gramtillhörighet och oxidastest) 
• Identifiering med MALDI-TOF sekvensering 
• Konsultation vid validering och uppföljning av renrum 

Provtagning och validering utförs av erfaren ALS laboratoriepersonal. 

För kunder som önskar en komplett lösning inom omgivningshygien samverkar ALS med etablerade samarbetspartners för övriga delar av processen, vilket säkerställer ett sammanhängande, kvalitetssäkrat och effektivt arbetsflöde. 

Kontakta oss gärna för att diskutera hur vi kan anpassa upplägget efter era behov. 

Mycoplasma Testing

ALS kan identifiera kontaminering av mycoplasma i läkemedel inom en arbetsdag. Den snabbhet och precision som qPCR-tekniken (kvantitativ PCR) erbjuder gör vårt MycoSEQ™ Plus Mycoplasma Detection Kit till ett effektivare alternativ jämfört med traditionella odlingsbaserade metoder.

Mycoplasmatestning är ett regulatoriskt krav från globala myndigheter som FDA och EMA. Vid cellbaserad läkemedelsframställning kan mycoplasma utgöra en kvalitets- och säkerhetsrisk som påverkar cellens fysikalisk-kemiska egenskaper, och kan även minska produktionsmängd och effektivisering i tillverkningsprocessen.

Våra PCR-baserade metoder följer riktlinjer från USP Chapter <1125> "Nucleic Acid-Based Techniques—General" och Ph. Eur Chapter 2.6.21 "Nucleic Acid Amplification Techniques", vilket säkerställer hög kvalitet och pålitlighet i testprocessen.

 

Specifika Mikroorganismer

ALS erbjuder kvalitativ analys i läkemedel och medical device för att säkerställa frånvaro av specifika mikroorganismer. Dessa analyser tillsammans med totalhaltsbestämning används ofta för att frisläppa produkter till marknaden. Metoderna är utformade i enlighet frisläppning

• Staphylococcus aureus
• Pseudomonas aeruginosa
• Escherichia coli
• Salmonella
• Candida albicans
• Bile-tolerant gramnegativ bacteria